DB5117∕T 100-2024 DNA分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术规范(达州市)
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ID： |
1E54374B7BCD4D039770C347F16C37C5 |
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文件大小(MB)： |
0.32 |
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页数： |
9 |
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文件格式： |
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日期： |
2024/10/20 |
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购买： |
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达州市市场监督管理局发布,四川省（ 达州市） 地方标准,DNA 分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术规范,Technical specifications for breeding green shell egg Jiuyuan black chickens using,DNA molecular markers,D B 5 1 1 7,DB5117/T 100—2024,2024-09-30 发布2024-09-30 实施,ICS 65.020.30,CCS B 43,DB5117/T 100-2024,I,前言,本文件按照GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定,起草,请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任,本文件由达州市农业农村局提出并归口,本文件起草位：达州市饲草饲料工作站、达州市畜牧技术推广站、达州职业技术学院、西南大,学、万源市畜禽品种改良站、万源市聚源旧院黑鸡养殖专业合作社,本文件主要起草人：张丹萍、王乙茹、俄广鑫、曾艳、黎纯、蒋旭东、庞金柱、王宇、李祥、何,武亮,DB5117/T 100-2024,1,DNA分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术规范,1 范围,本文件规定了DNA 分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡的技术要求,本文件适用于绿壳蛋旧院黑鸡的DNA 分子标记选育,2 规范性引用文件,下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文,件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适,用于本文件,GB/T 40188 畜禽分子标记辅助育种技术规程,NY/T 823 家禽生产性能名词术语和度量计算方法,NY/T 1673 畜禽微卫星DNA 遗传多样性检测技术规程,NY/T 2695 牛遗传缺陷基因检测技术规程,DB5117/T 31 地理标志产品旧院黑鸡,DB5117/T 99 旧院黑鸡繁育技术规程,3 术语和定义,下列术语和定义适用于本文件,3.1,DNA分子标记DNA Molecular Markers,DNA 分子标记(DNA Molecular Markers)，是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的遗传标,记，是DNA 水平遗传多态性的直接的反映。分子标记是生物遗传标记的一种，通过引物设计的不,同，用PCR 的方法在生物的基因组DNA 上扩增出相关条带，通过电泳、软件识别、分析，可用作生,物遗传信息的研究,4 缩略语,下列缩略语适用于本文件,Bp：base pair，碱基对；,DNA：deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸；,PAGE：polyacrylamide gelelectrophoresis，聚丙烯酰胺凝胶电泳；,PCR：polymerase chain reaction，聚合酶链式反应；,DB5117/T 100-2024,2,Taq 酶：Taq-DNA polymerase，耐热DNA 聚合酶；,ddH2O：双蒸水（超纯水）,5 DNA 分子标记选育绿壳蛋旧院黑鸡技术的适用范围,应符合DB5117/T 31 规定区域内的旧院黑鸡种公鸡和产绿壳蛋旧院黑鸡种母鸡,6 要求,6.1 选育技术,6.1.1 组建选育基础群,6.1.1.1 选择22~30 周龄产绿壳蛋种母鸡和性成熟种公鸡组建选育基础群，公母比例1:5~1:8，群体规,模不低于2000 只,6.1.1.2 基础群体重、体尺的测定应按照NY/T 823 的要求执行,6.1.1.3 基础群产蛋性能应符合DB5117/T 99 的规定,6.1.1.4 基础群外貌特征和生产性能应符合DB5117/T 99 的规定,6.1.2 基因筛选方法,6.1.2.1 样品采集、制备,对基础群个体翅下静脉采血，样品标记，贮存于不高于-20℃容器中送样,6.1.2.2 样品整理核对,对样品编号进行核对，录入相关系统,6.1.2.3 DNA 提取,应采用全血DNA 提取试剂盒提取基础群个体DNA，提取方法应按照GB/T 40188 的要求执行,6.1.2.4 DNA 浓度和纯度的检测,用0.8% 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 浓度和纯度，检测结果见图1。选留泳道中的DNA 样品带,型清晰、整齐，无明显的拖尾现象样品，并用ND-10001 紫外分光光度计检测其浓度和纯度，选OD,260/280 值均在1.8~2.0 的样品，置于-20℃ 保存,图1 鸡基因组DNA的0.8%琼脂糖凝胶电泳结,DB5117/T 100-2024,3,6.1.2.5 目标片段筛选,6.1.2.5.1 引物序列设计,宜采用Primer Premier 5.0 分析设计引物，用引物筛选目标片段应符合表1 的要求，扩增片段长度,为364bp 和/或190bp,表1 扩增EAV-HP 的引物序列信息,引物名称引物序列（5′→3′）,PCR,C26830-ins-F GCATTTCACAAACGGGTGTA,C26830-ins1-R CCCAGCAGTAAGCCCTACAT,C26830-ins2-R CAAAACCACAAAGGTAATGTTCA,6.1.2.5.2 扩增目标片段,采用PCR 扩增，PCR 采用10 μL 体系：上游引物0.2 μL，DNA 模板1μL，下游引物各0.1,μL，2×Easy Taq PCR Super Mix（＋dye）5 μL，ddH2O 补足10 μL。PCR 扩增程序：95℃预变性,5 min；95℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延……
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